वेयल एलसीएमएस-टीक्यू 9200 एलसी-एमएस/एमएस प्रणाली द्वारा तेल युक्त फसलों में समूह 1 के कार्सिनोजेन अफलाटॉक्सिन बी1 का निर्धारण

अफलाटोक्सिन बी₁एक अत्यधिक विषाक्त द्वितीयक चयापचय है जो मुख्य रूप से Aspergillus flavusऔर Aspergillus parasiticus. अफलाटोक्सिन परिवार के बीच, यह सबसे मजबूत विषाक्तता और सबसे व्यापक वितरण प्रदर्शित करता है.यह इंट्रासेल्युलर डीएनए और आरएनए संश्लेषण को बाधित करके और प्रोटीन चयापचय में हस्तक्षेप करके अपने विषाक्त प्रभावों का प्रयोग करता हैयकृत पर अत्यधिक लक्षित हानिकारक प्रभाव के साथ।अन्य माइकोटॉक्सिन जैसे कि ओक्रोटॉक्सिन और पैटुलिन की तुलना में, अफ्लाटॉक्सिन बी₁यह अत्यधिक विषाक्त है और इसकी कार्सिनोजेनिकता अच्छी तरह से स्थापित है। समूह 1 कैंसरजनविश्व स्वास्थ्य संगठन (डब्ल्यूएचओ) द्वारा। यह अक्सर मटर, मकई, नट्स और वनस्पति तेलों जैसी तेल युक्त फसलों में पाया जाता है,इसे विश्व स्तर पर खाद्य सुरक्षा नियंत्रण के लिए प्राथमिकता वाला प्रदूषक बना रहा है.

अफ्लाटोक्सिन बी से दूषित₁आमतौर पर तब होता है जब तेल युक्त फसलों को रोपण, कटाई या भंडारण के दौरान उच्च तापमान और उच्च आर्द्रता की स्थिति में रखा जाता है, जो कवक के विकास को बढ़ावा देता है।इसके स्थिर रासायनिक गुणों के कारणअफलाटोक्सिन बी₁पारंपरिक खाना पकाने के तापमान से नष्ट नहीं हो सकते हैं, जिससे कृषि उत्पादों और प्रसंस्कृत खाद्य पदार्थों में अवशेषों की समस्याएं आती रहती हैं।

उच्च खुराक का अल्पकालिक सेवन तीव्र विषाक्तता का कारण बन सकता है, जिसमें गंभीर पेट दर्द, उल्टी, पीलिया और यकृत की विफलता जैसे लक्षण दिखाई देते हैं, जो गंभीर मामलों में घातक हो सकते हैं।दीर्घकालिक कम खुराक के संपर्क से यकृत में संचय होता हैकम प्रतिरक्षा वाले लोगों में, जिनमें बच्चे, बुजुर्ग शामिल हैं,और पहले से मौजूद यकृत रोगों वाले व्यक्तियोंAflatoxin B के अधिक जोखिम में हैं।₁विषाक्तता

चीन में राष्ट्रीय मानक GB 2761-2017 (राष्ट्रीय खाद्य सुरक्षा मानक ️ खाद्य पदार्थों में माइकोटॉक्सिन के अधिकतम स्तर) में अफ्लाटोक्सिन बी के लिए अधिकतम अवशेष सीमाएं निर्दिष्ट हैं।₁विभिन्न प्रकार के खाद्य पदार्थों में जीबी 5009.22-2016 (खाद्य पदार्थों में अफलाटोक्सिन बी और जी का निर्धारण)अफ्लाटोक्सिन बी के निर्धारण के लिए आधिकारिक विश्लेषणात्मक विधियां प्रदान करता है₁.

इस आवेदन नोट में एफ़्लैटोक्सिन बी के निर्धारण के लिए एक आइसोटोप पतली तरल क्रोमैटोग्राफी-टैंडम मास स्पेक्ट्रोमेट्री (एलसी-एमएस/एमएस) विधि की स्थापना का वर्णन किया गया है।₁Wayeal LCMS-TQ9200 LC-MS/MS प्रणाली का उपयोग करना।

कीवर्डःट्रिपल क्वाड्रूपोल; अफलाटॉक्सिन बी₁; आइसोटोप पतली तरल क्रोमैटोग्राफी-टैंडम द्रव्यमान स्पेक्ट्रोमीटर।

1उपकरण और अभिकर्मक

1.1 उपकरण विन्यास

तालिका 1 उपकरण विन्यास सूची

1.2 अभिकर्मक और मानक

तालिका 2 अभिकर्मक और मानक

1.3 प्रयोग सामग्री और सहायक उपकरण

वर्टेक्स मिक्सर

उच्च गति वाले केन्द्रापसारक

विश्लेषणात्मक संतुलन

केन्द्रापसारक

ठोस-चरण निष्कर्षण (एसपीई) जनरेटर (वैक्यूम पंप के साथ)

नाइट्रोजन वाष्पीकरण

शेकर

2प्रयोग विधि

2.1 समाधान तैयार करना

2.1.15 एमएमओएल/एल अमोनियम एसीटेट सॉल्यूशन:0.39 ग्राम अमोनियम एसीटेट का वजन करें, इसे पानी में भंग करें और 1000 मिलीलीटर तक पतला करें। अच्छी तरह मिलाएं।

2.1.1 मेथनॉल-एसीटोनिट्राइल समाधान:100 मिलीलीटर मेथनॉल में 100 मिलीलीटर एसीटोनिट्राइल मिलाएं, फिर अच्छी तरह मिलाएं।

2.2 नमूना पूर्व उपचार

2.2.1 नमूना निकासी

गेहूं का आटा एक 2 मिमी एपर्चर परीक्षण छलनी के माध्यम से पारित करें। एक 50 मिलीलीटर केन्द्रापसारक ट्यूब में नमूने के 5 ग्राम (सटीकता 0.01 ग्राम) वजन। 100 जोड़ेंμआइसोटोप आंतरिक मानक कार्य समाधान (100ng/mL) का L, घुमावदार करके मिलाएं, और 30 मिनट के लिए खड़े होने दें। मिश्रण के लिए 20mL मेथनॉल-पानी समाधान (70+30, v/v), घुमावदार जोड़ें।और 20 मिनट के लिए एक कक्षीय शेकर पर हिलाओ10 मिनट के लिए 6000 आर/मिनट पर सेंट्रीफ्यूज करें। बाद के उपयोग के लिए सुपरनाटेंट इकट्ठा करें।

2.2.2 नमूना शुद्धिकरण

एक कंटेनर में 4 मिलीलीटर सुपरनाटेंट को सटीक रूप से स्थानांतरित करें, पीबीएस में 23 मिलीलीटर 1% ट्रिटन एक्स-100 जोड़ें, और अच्छी तरह से मिलाएं।

जब प्रतिरक्षा संबंधी स्तंभ में मूल तरल पदार्थ पूरी तरह से सूखा हो जाए, तो उपरोक्त नमूना समाधान को 50 मिलीलीटर की सिरिंज बैरल में स्थानांतरित करें।प्रवाह दर को इस तरह से समायोजित करें कि नमूना समाधान 1 ¢ 3 mL/min की दर से स्तंभ के माध्यम से लगातार गुजरता है. नमूना समाधान पूरी तरह से सूख जाने के बाद, 2 × 10 मिलीलीटर पानी को सिरिंज बैरल में जोड़ें और प्रतिरक्षा संबद्धता स्तंभ को स्थिर प्रवाह दर पर धोएं.एक वैक्यूम पंप का उपयोग कर स्तंभ को सूखा.

वैक्यूम प्रणाली को डिस्कनेक्ट करें. प्रतिरक्षा संबद्धता स्तंभ के नीचे एक 10 मिलीलीटर ग्रेजुएटेड टेस्ट ट्यूब रखें, 50 मिलीलीटर सिरिंज बैरल निकालें,और 2 × 1 मिलीलीटर मेथनॉल जोड़कर 1 ¢ 3 मिलीलीटर/मिनट के नियंत्रित प्रवाह दर पर स्तंभ को एल्यूट करें. फिर एक वैक्यूम पंप का उपयोग कर कॉलम को फिर से सूखा.50 डिग्री सेल्सियस पर नाइट्रोजन की धारा के नीचे एलुएट को धीरे-धीरे वाष्पित करें। अवशेष को भंग करने के लिए प्रारंभिक मोबाइल चरण के 1 मिलीलीटर जोड़ें, 30 सेकंड के लिए भंवर। एक 0 के माध्यम से फ़िल्टर करें।22 μm झिल्ली फ़िल्टर, और बाद के इंजेक्शन के लिए एक ऑटोसैंपलर शीशी में फ़िल्ट्रेट इकट्ठा करें।

2.3 प्रयोग की स्थिति

2.3.1 तरल गुणसूत्र पद्धति

स्तंभ: C18, 1.7μm, 2.1×50 मिमी

मोबाइल चरण चरणः एः मेथनॉल-एसीटोनिट्राइल समाधान; चरण बीः 5mmol/L अमोनियम एसीटेट समाधान

प्रवाह दर: 0.3 मिलीलीटर/मिनट

स्तंभ तापमानः 40°सी

इंजेक्शन वॉल्यूमः 3μL

2.3.2 मास स्पेक्ट्रोमेट्री विधि

तालिका 3 यौगिक द्रव्यमान स्पेक्ट्रोमेट्री पैरामीटर

नोटः तारांकन (*) मात्रात्मक आयन को दर्शाता है।

3प्रयोग का परिणाम

3.1 मानक गुणसूत्र

अफ्लाटोक्सिन बी का निर्धारण₁और आइसोटोप आंतरिक मानक 13C17-अफ्लाटोक्सिन बी₁जैसा कि चित्र 1 में दर्शाया गया है, दोनों विश्लेषकों ने उत्कृष्ट शिखर आकार और संतोषजनक प्रतिक्रियाएं दिखाईं, जो प्रयोगात्मक विश्लेषण के लिए आवश्यकताओं को पूरा करती हैं।

चित्रा 1 अफलाटोक्सिन बी का क्रोमैटोग्राम₁और आइसोटोप आंतरिक मानक 13सी17​-अफलाटोक्सिन बी₁

3.2 रैखिक सीमा

An appropriate volume of the standard stock solution and mixed isotope internal standard working solution were accurately transferred and diluted with the initial mobile phase to prepare a series of standard working solutions with aflatoxin B₁50, 20, 10, 5, 2, 1 और 0.5ng/mL की एकाग्रता में। प्रत्येक समाधान में 2ng/mL की एकाग्रता में आइसोटोप आंतरिक मानक था। इन मानकों का उपयोग करके एक कैलिब्रेशन वक्र का निर्माण किया गया था।0 की रैखिक सीमा से ऊपर.5