वेयल एलसीएमएस-टीक्यू9200 तरल गुणसूत्र-टैंडम द्रव्यमान स्पेक्ट्रोमेट्री प्रणाली का उपयोग करके सूअर के मांस में β-अगोनिस्ट अवशेषों का निर्धारण

यह प्रयोग "जीबी 31658" को संदर्भित करता है।22-2022 National Food Safety Standard — Determination of β-Agonist Residues in Animal-Derived Foods by Liquid Chromatography-Tandem Mass Spectrometry" and utilizes the Wayeal LCMS-TQ9200 liquid chromatography-tandem mass spectrometry system to determine the content of β-agonists in porkप्रयोगात्मक परिणामों से पता चलता है कि प्रणाली उपयुक्तता परीक्षण में अच्छी तरह से आकार के शिखर और अच्छी रैखिकता का प्रदर्शन किया गया, जो प्रयोगात्मक आवश्यकताओं को पूरा करता है।β-agonist मानक कार्य समाधान के लिए प्रतिधारण समय दोहराव 1% से कम था, और पीक क्षेत्र दोहराव 3% से कम था, जो अच्छी दोहराव का संकेत देता है।.2ng/mL और 0.5ng/mL क्रमशः 3 और 10 से काफी अधिक थे, जो प्रयोगात्मक आवश्यकताओं को पूरा करते थे।

सूअर के मांस के नमूना परीक्षण में कोई β-agonists का पता नहीं चला। उपरोक्त सभी डेटा मानक विधि द्वारा निर्दिष्ट साधन आवश्यकताओं को पूरा करते हैं.

कीवर्डःतरल क्रोमैटोग्राफी-टैंडम मास स्पेक्ट्रोमेट्री; β-अगोनिस्ट; क्लेनबुटेरोल; खाद्य सुरक्षा।

1उपकरण और अभिकर्मक

1.1 एलसीएमएस की कॉन्फ़िगरेशन सूची

तालिका 1 उपकरण विन्यास सूची

1.2 अभिकर्मक और मानक

तालिका 2 अभिकर्मकों और मानकों की सूची

1.3 प्रयोग सामग्री और सहायक उपकरण

अल्ट्रासोनिक क्लीनर

भंवर मिश्रणक

जल स्नान निरंतर तापमान शकर

उच्च-गति केन्द्रापसारक

2प्रयोग विधि

2.1 नमूना पूर्व उपचार

2.1.1 एंजाइमिक हाइड्रोलिसिस और निष्कर्षण

एक 50mL सेंट्रीफ्यूज ट्यूब में 2g नमूने ( ± 0.05g के लिए सटीक) का वजन करें। 0.2mol/L अमोनियम एसीटेट बफर समाधान के 6mL और β-glucuronidase/arylsulfatase के 40μL जोड़ें। बारीकी से मिश्रण करने के लिए भंवर,और अंधेरे में 37 डिग्री सेल्सियस पर 16 घंटे तक पानी के स्नान में हिलाते हुए इनक्यूबेट करें. बाद के उपयोग के लिए कमरे के तापमान तक ठंडा होने दें.

2.1.2 निष्कर्षण, शुद्धिकरण और एकाग्रता

तैयार समाधान ले लो, 100ng/mL आंतरिक मानक कार्य समाधान के 100μL जोड़ें, भंवर को अच्छी तरह से मिश्रण करने के लिए, और 8000r/min पर 8 मिनट के लिए केन्द्रापसार करें। सुपरनाटेंट एकत्र करें, 0 के 5mL जोड़ें।1mol/L पर्क्लोरिक एसिड समाधान, घुमावदार मिश्रण करने के लिए, और पर्क्लोरिक एसिड का उपयोग करके पीएच को 1.0 ± 0.2 तक समायोजित करें। 8000r/min पर 8 मिनट के लिए सेंट्रिफ्यूगेशन के बाद, सुपरनाटनेंट का पीएच 10 ± 0 तक समायोजित करें।5 10mol/L सोडियम हाइड्रॉक्साइड समाधान का उपयोग करके. 15mL एथिल एसीटेट जोड़ें, 5 मिनट के लिए मध्यम गति से हिलाएं, और 5000r/min पर 5 मिनट के लिए केन्द्रापसार करें। ऊपरी कार्बनिक परत को इकट्ठा करें। शेष जलीय परत में,टर्ट-ब्यूटिल मिथाइल ईथर के 10 मिलीलीटर जोड़ें, मध्यम गति से 5 मिनट तक हिलाएं, 5000r/min पर 5 मिनट तक सेंट्रिफ्यूज करें और ऊपरी कार्बनिक परत को इकट्ठा करें। सभी कार्बनिक परतों को मिलाएं और 50°C पर नाइट्रोजन स्ट्रीम के नीचे सूखने तक वाष्पित करें।अवशेष को 2% मृगजन्य एसिड समाधान के 5 मिलीलीटर में भंग करें और अलग रख दें. मिश्रित मोड कैशन एक्सचेंज ठोस चरण निष्कर्षण स्तंभ को 3 एमएल मेथनॉल और 3 एमएल 2% फॉर्मिक एसिड के साथ क्रमिक रूप से सक्रिय करके तैयार करें। तैयार समाधान को स्तंभ पर लोड करें,क्रमिक रूप से 2 प्रतिशत चींटी एसिड के 3 मिलीलीटर और मेथनॉल के 3 मिलीलीटर के साथ कुल्ला करें, और वैक्यूम के तहत सूखें. 5% एमोनिएटेड मेथनॉल समाधान के 3mL के साथ स्तंभ को एल्यूट करें। 50°C पर नाइट्रोजन धारा के तहत सूखने तक एल्यूएट को वाष्पित करें। 0.5mL मेथनॉल में अवशेष को फिर से भंग करें।1% चींटी एसिड समाधान (10:90, v/v), अच्छी तरह से मिलाएं, और तरल गुणसूत्र-टैंडम द्रव्यमान स्पेक्ट्रोमीटर द्वारा विश्लेषण के लिए 0.22μm माइक्रोपोरोस झिल्ली के माध्यम से फ़िल्टर करें।

2.2 प्रयोग की शर्तें

2.2.1 तरल क्रोमैटोग्राफिक परिस्थितियाँ

क्रोमैटोग्राफी स्तंभ √ C18, 1.8μm 2.1*100mm

गतिशील चरण: A: पानी में 0.1% चींटी का अम्ल; B: मेथनॉल

प्रवाह दर: 0.3 मिलीलीटर/मिनट

स्तंभ का तापमानः 40°C

इंजेक्शन मात्राः 3μL

3.सिस्टम उपयुक्तता परीक्षण

सिस्टम उपयुक्तता परीक्षण से पता चलता है कि लक्ष्य शिखर अन्य अशुद्धता शिखरों से हस्तक्षेप के बिना अच्छी तरह से आकार में हैं, प्रयोगात्मक आवश्यकताओं को पूरा करते हैं।

चित्र 1 सात β-अगोनिस्ट परीक्षण का क्रोमैटोग्राम (1ng/mL)

3.2 रैखिक सीमा

β-agonist के मानक समाधानों को लेते हुए और मध्यवर्ती एकाग्रता वाले कार्य समाधानों का उपयोग करते हुए, एक मानक वक्र चरणबद्ध रूप से तैयार किया गया। सात β-agonists के लिए रैखिक सीमा 0.550ng/mL थी,R2 > 0 के साथ.99, जो एक अच्छा रैखिक संबंध दर्शाता है।

तालिका 3 β-agonists के लिए रैखिक सीमाओं की तालिका

चित्रा 2 सात β-अगोनिस्ट का मानक वक्र गुणसूत्र

3.3 पता लगाने की सीमा (LOD) और मात्रा की सीमा (LOQ)

इस पद्धति में, β-agonists के लिए पता लगाने की सीमा (LOD) और मात्रा की सीमा (LOQ) क्रमशः 0.2ng/mL और 0.5ng/mL पर निर्धारित की जाती है। इस पद्धति में प्रत्येक यौगिक के लिए,एलओडी और एलओक्यू के लिए निर्दिष्ट सांद्रता पर संकेत-शोर अनुपात 3 और 10 से अधिक है, क्रमशः प्रयोगात्मक संवेदनशीलता की आवश्यकताओं को पूरा करते हैं।

तालिका 4 प्रत्येक यौगिक के लिए एलओडी और एलओक्यू के लिए संबंधित संकेत-शोर अनुपात

चित्रा 3 लोड और लोक्स एकाग्रता पर सात β-अगोनिस्टों के आयन क्रोमैटोग्राम

3.4 सटीकता परीक्षण

अवधारण समय और पीक क्षेत्र विचलन की तुलना करने के लिए निम्न, मध्यम और उच्च सांद्रता में β-agonist मानक पदार्थों का मिश्रित समाधान लिया गया और लगातार छह बार इंजेक्ट किया गया।परिणाम नीचे दी गई तालिका में दिखाए गए हैंसभी β-agonists ने प्रयोगात्मक आवश्यकताओं को पूरा करते हुए 1% से कम अवधारण समय विचलन और 3% से कम पीक क्षेत्र विचलन दिखाया।

तालिका 5 प्रत्येक यौगिक के लिए परिशुद्धता परीक्षण

चित्र 4सात β-अगोनिस्ट (6 इंजेक्शन) के सटीक परीक्षण गुणसूत्र

3.5 नमूना परीक्षण

बाजार से खरीदे गए सूअर के मांस के नमूनों का परीक्षण उपर्युक्त पूर्व उपचार विधि के अनुसार किया गया और कोई β-agonists का पता नहीं चला।सात β-agonists के अनुरूप प्रतिधारण समय पर कोई क्रोमैटोग्राफिक शिखर नहीं देखा गया।, जबकि अन्य शिखर एंजाइमेटिक हाइड्रोलिसिस के बाद मैट्रिक्स संकेतों का प्रतिनिधित्व करते हैं।

चित्र 5 सूअर के मांस के नमूने का परीक्षण क्रोमैटोग्राम

4निष्कर्ष

यह विधि सूअर के मांस में β-agonists के निर्धारण के लिए Wayeal LCMS-TQ9200 तरल क्रोमैटोग्राफी-टैंडम द्रव्यमान स्पेक्ट्रोमीटर प्रणाली का उपयोग करती है।आंकड़ों से पता चलता है कि सभी क्रोमैटोग्राफिक चोटियों में बिना कूबड़ के अच्छा आकार होता है।, संवेदनशीलता प्रयोगात्मक आवश्यकताओं को पूरा करती है, रैखिक सहसंबंध गुणांक 0 से अधिक है।99, और प्रत्येक यौगिक के छह लगातार इंजेक्शन के लिए 1% से कम अवधारण समय विचलन और 3% के भीतर पीक क्षेत्र विचलन के साथ सटीकता संतोषजनक है।सूअर के मांस के नमूना परीक्षणों में कोई β-agonists का पता नहीं चलाइन परिणामों से पता चलता है कि वेयल एलसी-एमएस/एमएस प्रणाली से लैस विधि लक्ष्य विश्लेषकों के लिए नियमित गुणात्मक और मात्रात्मक पता लगाने की आवश्यकताओं को पूरा करती है।