चिकन के मांस में एम्फेनिकॉल एंटीबायोटिक अवशेषों का निर्धारण Wayeal LCMS-TQ9200 द्वारा

कीवर्डःएलसीएमएस, एम्फेनिकॉल, खाद्य सुरक्षा, पशु चिकित्सा दवा अवशेष।

1उपकरण और अभिकर्मक

1.1 एलसीएमएस की कॉन्फ़िगरेशन सूची

तालिका 1 उपकरण विन्यास सूची

1.3 प्रयोग सामग्री और सहायक उपकरण

अल्ट्रासोनिक क्लीनर

वर्टेक्स मिक्सर

जल स्नान नाइट्रोजन वाष्पीकरण

उच्च गति वाले केन्द्रापसारक

2प्रयोग पद्धति

2.1 समाधान तैयार करना

2.1.1 2% एमोनिएटेड एथिल एसीटेट सॉल्यूशनः 4 मिलीलीटर अमोनिया पानी लें और इसे एथिल एसीटेट के साथ 200 मिलीलीटर तक पतला करें।

2.1.2 4% सोडियम क्लोराइड समाधान: 4 ग्राम सोडियम क्लोराइड लें, इसे पानी में भंग करें और 100 मिलीलीटर तक पतला करें।

2.1.3 4% सोडियम क्लोराइड से संतृप्त n-हेक्साइन सॉल्यूशनः 4% सोडियम क्लोराइड सॉल्यूशन की उपयुक्त मात्रा लें, अतिरिक्त n-हेक्साइन जोड़ें, मिश्रण करें, परत को अलग करने के लिए खड़े होने दें,और ऊपरी n-हेक्साइन परत ले लो.

2.1.4 मिश्रित आंतरिक मानक कार्य समाधानः मिश्रित आंतरिक मानक स्टॉक समाधान की उचित मात्रा लें।10ng/mL और अन्य आंतरिक मानकों (फ्लोरफेनिकॉल-डी 3) पर क्लोरामफेनिकॉल-डी 5 प्राप्त करने के लिए 20% मेथनॉल के साथ पतला, थाइमफेनिकॉल-डी 3 और फ्लोरफेनिकॉल अमाइन-डी 3) प्रत्येक 50 एनजी/एमएल पर।

2.2 नमूना पूर्व उपचार

2.2.1 नमूना निष्कर्षणः नमूना का 2 ग्राम वजन (±0.01 ग्राम तक सटीकता के साथ), मिश्रित आंतरिक मानक कार्य समाधान का 100μL जोड़ें, 1 मिनट के लिए भंवर, 2% एमोनिया एथिल एसीटेट समाधान का 10mL जोड़ें,10 मिनट के लिए भंवर, 8000 आरपीएम पर 5 मिनट के लिए सेंट्रिफ्यूज करें, और सुपरनाटेंट इकट्ठा करें। अवशेष में 2% एमोनिया एथिल एसीटेट समाधान के एक और 10 मिलीलीटर जोड़ें, और निष्कर्षण प्रक्रिया को दोहराएं।दोनों सुपरनाटेंट्स को मिलाएं, 50°C पर नाइट्रोजन की धारा के नीचे सूखने तक वाष्पित करें, और उपयोग के लिए आरक्षित करें।

2.2.2 नमूना शुद्धिकरण: शुद्धिकरण अवशेष में 3 मिलीलीटर 4% सोडियम क्लोराइड समाधान जोड़ें, घुमावदार विघटित करें, फिर 5% सोडियम क्लोराइड संतृप्त एन-हेक्साइन समाधान के 5 मिलीलीटर जोड़ें, घुमावदार 30 सेकंड के लिए,8000 आरपीएम पर 5 मिनट के लिए केन्द्रापसारक, और ऊपरी n-हेक्साइन परत को फेंक दें। एक बार degreasing प्रक्रिया दोहराएं। 2% एमोनिया एथिल एसीटेट समाधान के 5mL जोड़ें, 10 मिनट के लिए भंवर, 8000 rpm पर 5 मिनट के लिए centrifuge,और सुपरनाटनट को इकट्ठा करें. अवशेष में 2% एमोनिया एथिल एसीटेट समाधान के एक और 5 मिलीलीटर जोड़ें और निष्कर्षण प्रक्रिया को दोहराएं। सुपरनाटेंट्स को मिलाएं, 50 डिग्री सेल्सियस पर नाइट्रोजन की धारा के नीचे सूखने तक वाष्पित करें,20% मेथनॉल समाधान का 1 मिलीलीटर जोड़ें, 30s के लिए भंवर, एक झिल्ली के माध्यम से फ़िल्टर, और साधन विश्लेषण का इंतजार.

2.3 प्रयोग की शर्तें

2.3.1 तरल क्रोमैटोग्राफी की शर्तें

क्रोमैटोग्राफी स्तंभ: C18 1.7μm 2.1x50mm

गतिशील चरण: एः एसीटोनिट्राइल; बीः पानी में 2 एमएम अमोनियम फॉर्मेट

प्रवाह दर: 0.3mL/मिनट

स्तंभ का तापमानः 40 °C

इंजेक्शन वॉल्यूम: 5μL

2.3.2 मास स्पेक्ट्रोमेट्री की शर्तें

तालिका 3 आयन स्रोत पैरामीटर

3प्रयोग का परिणाम

3.1 मानक गुणसूत्र

चार अमाइड एंटीबायोटिक्स और उनके आंतरिक मानकों का निर्धारण 6 मिनट के भीतर पूरा हो गया।और प्रत्येक यौगिक ने संतोषजनक प्रतिक्रिया प्रदर्शित की, प्रयोगात्मक आवश्यकताओं को पूरा करता है।

चित्र 1 4 एम्फेनिकॉल एंटीबायोटिक्स का क्रोमैटोग्राम और आंतरिक मानक (क्लोराम्फेनिकॉल 0.2ng/mL, अन्य एंटीबायोटिक्स 1ng/mL)

3.2 रैखिक सीमा

अमाइड अल्कोहल मिश्रित मानक घोल की उचित मात्रा लें और मानक वक्र तैयार करने के लिए इसे चरणबद्ध रूप से एकाग्रता की एक श्रृंखला तक पतला करें।मात्रात्मक विश्लेषण के लिए आइसोटोप आंतरिक मानक विधि का प्रयोग किया गया. रैखिक सीमा क्लोरामफेनिकॉल के लिए 0.2-10 ng/mL और फ्लोरफेनिकॉल अमाइन, थाइमफेनिकॉल और फ्लोरफेनिकॉल के लिए 1-50 ng/mL थी.रैखिक पता लगाने के परिणामों और ज्ञात सांद्रता के बीच विचलन अधिकतम अनुमेय विचलन से कम था, R2 मान 0.9958 से 0 तक है।9998, सभी घटकों के लिए उत्कृष्ट रैखिकता दर्शाता है।

तालिका 4 यौगिकों का रैखिक दायरा

चित्र 2 चार यौगिकों के कैलिब्रेशन वक्र डेटा

3.3 LOD और LOQ

चीनी राष्ट्रीय खाद्य सुरक्षा मानक GB 31658.20-2022 में यह निर्दिष्ट किया गया है कि इस पद्धति के लिए, क्लोरामफेनिकॉल के लिए पता लगाने की सीमा (LOD) 0.1μg/kg और मात्रात्मक सीमा (LOQ) 0 है।2μg/kg; जबकि थियाम्फेनिकॉल, फ्लोरफेनिकॉल और फ्लोरफेनिकॉल अमाइन के लिए, LOD 0.5μg/kg और LOQ 1 μg/kg है।सभी लक्षित यौगिकों के लिए संकेत-शोर अनुपात पता लगाने की सीमा (LOD) और मात्रात्मक सीमा (LOQ) की निर्दिष्ट सांद्रता में 3 और 10 से काफी अधिक है, जो राष्ट्रीय मानक में निर्दिष्ट संवेदनशीलता आवश्यकताओं का अनुपालन करता है।

तालिका 5 प्रत्येक यौगिक के लिए पता लगाने और मात्रात्मक सीमाएं

चित्रा 3 चार यौगिकों के लिए पता लगाने की सीमाओं और मात्रात्मक सीमाओं के क्रोमैटोग्राम

3.4 परिशुद्धता परीक्षण

कम, मध्यम और उच्च सांद्रता वाले एम्फेनिकॉल मानक मिश्रण समाधान लें, और अवधारण समय और शिखर क्षेत्र में विचलन की तुलना करने के लिए लगातार छह इंजेक्शन करें।परिणाम नीचे दी गई तालिका में दिखाए गए हैंसभी एम्फेनिकॉल यौगिकों के प्रतिधारण समय के विचलन 1% से कम थे और पीक क्षेत्र विचलन 5% से कम थे।राष्ट्रीय मानक द्वारा निर्दिष्ट RSD ≤ 15% की सटीकता की आवश्यकता को पूरा करना.

तालिका 6 प्रत्येक यौगिक के लिए परिशुद्धता परीक्षण

चित्र 4 चार अमाइड अल्कोहल यौगिकों के सटीक गुणसूत्र

3.5 मैट्रिक्स स्पाइकिंग रिकवरी टेस्ट

इस पता लगाने की विधि की सटीकता का मूल्यांकन एक स्पाइक रिकवरी परीक्षण का उपयोग करके किया गया था। पूर्व उपचार के लिए विभिन्न अनुपातों में रिक्त मैट्रिक्स नमूने में मानक नमूनों की ज्ञात सांद्रता जोड़ें,उच्च तापमान पर मैट्रिक्स-स्पाइक किए गए नमूनों की तैयारीइन नमूनों के प्रत्येक एकाग्रता स्तर का छह बार स्वतंत्र रूप से विश्लेषण किया गया।पुनर्प्राप्ति दर की गणना मैट्रिक्स में स्पिकिंग से पहले और बाद में पाया गया एकाग्रता की तुलना करके की गई।, इस प्रकार विधि की सटीकता का मूल्यांकन किया जाता है। परिणाम इस प्रकार हैं: चिकन मैट्रिक्स में, सभी यौगिकों की स्पाइक रिकवरी दर 94.5% से 107.2% तक थी, जिसमें 5% के भीतर CV था,यह दर्शाता है कि सटीकता विधि आवश्यकताओं को पूरा करती है.

तालिका 6 मसालेदार चिकन मैट्रिक्स में यौगिकों की वसूली दरें

3.6 नमूना परीक्षण

सुपरमार्केट से बेतरतीब ढंग से खरीदे गए चिकन स्तन के नमूनों को ऊपर उल्लिखित नमूना पूर्व उपचार विधि का उपयोग करके निकाला और शुद्ध किया गया।चार अमाइड एंटीबायोटिक्स में से कोई भी नहीं पाया गया.

चित्र 5 सुपरमार्केट चिकन स्तन के नमूनों में चार अमाइड अल्कोहल यौगिकों का क्रोमैटोग्राम

4निष्कर्ष

यह विधि पशु-उत्पादित खाद्य पदार्थों में एम्फेनिकॉल एंटीबायोटिक्स के निर्धारण के लिए Wayeal LCMS-TQ9200 तरल क्रोमैटोग्राफी द्रव्यमान स्पेक्ट्रोमीटर प्रणाली का उपयोग करती है।दोनों सकारात्मक और नकारात्मक आयन मोड में यौगिकों के एक साथ अधिग्रहण की अनुमति देता हैइन आंकड़ों से पता चलता है कि यह विधि बिना किसी कटाई के अच्छी तरह से आकार वाले क्रोमैटोग्राफिक शिखर प्रदान करती है और इसकी संवेदनशीलता राष्ट्रीय मानक आवश्यकताओं को पूरा करती है।रैखिक सहसंबंध गुणांक सभी 0 से अधिक हैं.99लगातार छह इंजेक्शनों में सभी यौगिकों के लिए प्रतिधारण समय विचलन 1% के भीतर है और शिखर क्षेत्र विचलन 5% के भीतर है, जो अच्छी सटीकता का प्रदर्शन करता है।चिकन मैट्रिक्स में वृद्धि हुई वसूली दर 94.5 से 107.2% तक, 5 प्रतिशत के भीतर सीवी के साथ, यह दर्शाता है कि सटीकता पद्धतिगत आवश्यकताओं को पूरा करती है। सुपरमार्केट से यादृच्छिक रूप से खरीदे गए चिकन स्तन के नमूनों का विश्लेषण किया गया था,और चार में से कोई भी एम्फेनिकॉल एंटीबायोटिक का पता नहीं चला थाइससे पता चलता है कि वेयल की तरल क्रोमैटोग्राफी-मास स्पेक्ट्रोमेट्रिक प्रणाली से लैस विधिलक्ष्य नमूनों के नियमित गुणात्मक और मात्रात्मक पता लगाने की आवश्यकताओं को पूरा करता है.