उच्च प्रदर्शन वाली तरल क्रोमैटोग्राफी द्वारा फ़ीड में मेथियोनीन हाइड्रॉक्सी एनालॉग का निर्धारण

मेथियोनीन हाइड्रॉक्सी एनालॉग (MHA) एक कार्बनिक एसिड योजक है जिसका उपयोग फ़ीड उद्योग में मेथियोनीन के विकल्प के रूप में व्यापक रूप से किया जाता है।सूअर (सुअर के बच्चे और परिष्करण सूअर)मिथियोनीन के विकल्प के रूप में, यह फ़ीड लागत को कम करने में महत्वपूर्ण प्रभाव दिखाता है।जानवरों के आंतों के वातावरण में सुधार करना, और पशुओं की प्रतिरक्षा को बढ़ाता है।

यूवी डिटेक्शन के साथ उच्च प्रदर्शन तरल क्रोमैटोग्राफी विभिन्न जटिल फ़ीड नमूनों के विश्लेषण के लिए उपयुक्त है, इसकी उत्कृष्ट पृथक्करण दक्षता के कारण,मजबूत मैट्रिक्स हस्तक्षेप प्रतिरोध, उच्च पता लगाने की संवेदनशीलता, और स्थिर और विश्वसनीय मात्रात्मक परिणाम।यह प्रयोग मानक "उच्च प्रदर्शन तरल क्रोमैटोग्राफी द्वारा फ़ीड में मेथियोनीन हाइड्रॉक्सी एनालॉग का निर्धारण" (GB/T 19371-2025) के अनुसार किया गया था।. A Wayeal LC3400 series high performance liquid chromatograph equipped with a UV detector was employed to validate the sample pretreatment procedure and the liquid chromatographic separation and detection system, विभिन्न प्रकार के फ़ीड नमूनों में मेथियोनीन हाइड्रोक्सी एनालॉग का गुणात्मक पता लगाने और सटीक मात्रात्मक विश्लेषण करने में सक्षम है।

कीवर्डः फ़ूड; मेथियोनीन हाइड्रॉक्सी एनालॉग; उच्च प्रदर्शन तरल क्रोमैटोग्राफी।

1उपकरण और अभिकर्मक

1.1 एचपीएलसी विन्यास सूची

तालिका 1 उच्च प्रदर्शन तरल गुणसूत्र प्रणाली विन्यास सूची

1.2 अभिकर्मकों और संदर्भ मानकों की सूची

तालिका 2 अभिकर्मकों और संदर्भ मानकों की सूची

1.3 तरल क्रोमैटोग्राफी की शर्तें

तालिका 3 उच्च दक्षता तरल गुणसूत्र विज्ञान की स्थितियाँ

1.4 प्रयोग सामग्री और सहायक उपकरण

अल्ट्रासोनिक क्लीनर;

वर्टेक्स मिक्सर;

उच्च गति वाले केन्द्रापसारक;

विश्लेषणात्मक संतुलन;

शेकर.

2प्रयोग विधि

2.1 समाधान तैयार करना

2.1.1 मानक वक्र समाधान:

मेथियोनीन हाइड्रॉक्सी एनालॉग के संदर्भ मानक की उचित मात्रा को सटीक रूप से तौलना और इसे 10% एसीटोनिट्राइल में भंग करना ताकि 0 की द्रव्यमान सांद्रता पर मानक समाधानों की एक श्रृंखला तैयार की जा सके।5, 1.0, 2.0, 5.0, 10.0, 20.0, 40.0, और 80.0μg/mL. प्रत्येक मानक समाधान के 5mL को 15mL के बंद किए गए परीक्षण ट्यूबों में अलग से स्थानांतरित करें। 50% पोटेशियम हाइड्रॉक्साइड समाधान के 0.1mL को सटीक रूप से जोड़ें, और 15 सेकंड के लिए भंवर करें।फिर सटीक रूप से 0 जोड़ें.2mL 50% फॉस्फोरिक एसिड समाधान, और एक और 15 सेकंड के लिए भंवर। 8000r/min पर 5 मिनट के लिए सेंट्रीफ्यूज करें। विश्लेषण से पहले एक माइक्रोपोरोस झिल्ली फिल्टर के माध्यम से supernatant पारित करें।

2.1.2 परीक्षण नमूना समाधानः

एक कंटेनर में 5 ग्राम फ़ीड नमूने का वजन करें, 10% एसीटोनिट्राइल समाधान के 50 मिलीलीटर जोड़ें, और 30 सेकंड के लिए मिश्रण करें। एक शेकर पर रखें और 30 मिनट के लिए हिलाएं। 8000r/min पर 5 मिनट के लिए सेंट्रीफ्यूज करें,और बाद में उपयोग के लिए सुपरनाटेंट को बनाए रखें. उपर्युक्त सुपरनाटेंट के 5 एमएल को 15 एमएल की बंद ट्यूब में सटीक रूप से स्थानांतरित करें। 15 सेकंड के लिए 50% पोटेशियम हाइड्रॉक्साइड समाधान और वर्टेक्स के 0.1 एमएल को सटीक रूप से जोड़ें। फिर सटीक रूप से 0.50% फॉस्फोरिक एसिड समाधान के 2mL और एक और 15s के लिए भंवर. 8000r/min पर 5 मिनट तक सेंट्रिफ्यूज करें। विश्लेषण से पहले एक माइक्रोपोरोस झिल्ली फिल्टर के माध्यम से सुपरनाटेंट पास करें। दो समानांतर परीक्षण नमूना समाधान तैयार करें।

2.1.3 वसूली परीक्षण समाधानः

नमूना सुपरनाटेंट के 2.5 मिलीलीटर और प्रत्येक मानक श्रृंखला के समाधान के 2.5 मिलीलीटर को 15 मिलीलीटर के बंद किए गए टेस्ट ट्यूब में सटीक रूप से स्थानांतरित करें।50% पोटेशियम हाइड्रॉक्साइड समाधान का 1 मिलीलीटर और 15 सेकंड के लिए भंवर. फिर 0.2mL 50% फॉस्फोरिक एसिड सॉल्यूशन और वर्टेक्स को 15 सेकंड के लिए सटीक रूप से जोड़ें। 8000r/min पर 5 मिनट तक सेंट्रीफ्यूज करें।विश्लेषण से पहले सूक्ष्म छिद्रित झिल्ली फ़िल्टर के माध्यम से supernatant पारित करें.

3प्रयोग का परिणाम

3.1 रैखिकता और सीमा

तालिका 4 मानक वक्र एकाग्रता तालिका

चित्र 1 मेथियोनीन हाइड्रोक्सी एनालॉग का मानक वक्र

नोटः मेथियोनीन हाइड्रॉक्सी एनालॉग संदर्भ मानक समाधान की उचित मात्रा ली गई और मानक वक्र तैयार करने के लिए एकाग्रता की एक श्रृंखला तक सीरियल रूप से पतला किया गया।रैखिक सीमा 0 थी.5🙏80.0μg/mL, और सहसंबंध गुणांक (R) 0 था।99983, जो विश्लेषक के लिए उत्कृष्ट रैखिकता दर्शाता है।

3.2 सटीकता

चित्रा 2 संदर्भ मानक के लिए सटीक परीक्षण के ओवरलेड क्रोमैटोग्राम (20.0μg/mL)

तालिका 5 संदर्भ मानक (20.0μg/mL) के लिए परिशुद्धता परीक्षण डेटा

नोटः मेथियोनीन हाइड्रोक्सी एनालॉग का संदर्भ मानक (20 की एकाग्रता पर)0μरिटेन्शन समय की दोहरावशीलता (आरएसडी) 0.084% और पीक क्षेत्र की दोहरावशीलता 0.391% थी, जो कि अच्छे उपकरण सटीकता का संकेत देती है।

3.3 वसूली

चित्रा 3 फ़ीड में मेथियोनीन हाइड्रोक्सी एनालॉग के लिए रिकवरी परीक्षण के ओवरलेड क्रोमैटोग्राम

तालिका 6 फ़ूड में मेथियोनीन हाइड्रोक्सी एनालॉग के लिए वसूली परीक्षण डेटा

नोटः नमूना 40 की एकाग्रता पर संदर्भ मानक के साथ मिलाया गया था।0μऊपर वर्णित प्रक्रिया के अनुसार विश्लेषण किया गया। प्राप्त वसूली 88.56% थी, जो विधि की अच्छी सटीकता का संकेत देती है।

3.4 पता लगाने की सीमा (LOD)

चित्र 4 मेथियोनीन हाइड्रॉक्सी एनालॉग मानक का क्रोमैटोग्राम (2.5μजी/एमएल)

तालिका 7 मेथियोनीन हाइड्रोक्सी एनालॉग संदर्भ मानक के लिए परीक्षण डेटा (2.5μजी/एमएल)

नोटः उपरोक्त तालिका में दिखाए गए 2.5μg/mL पर मेथियोनीन हाइड्रोक्सी एनालॉग संदर्भ मानक के परीक्षण डेटा के आधार पर, पता लगाने की सैद्धांतिक सीमा (LOD) की गणना 0 के रूप में की गई थी।033μg/mL सिग्नल-शोर अनुपात 3 (S/N = 3) पर.

3.5 फ़ीड के नमूने का परीक्षण

चित्र 5 फ़ीड के नमूने का क्रोमैटोग्राम

नोटः फीड के नमूने में मेथियोनीन हाइड्रोक्सी एनालॉग का पता 0 की एकाग्रता पर लगाया गया।402μg/mL

4निष्कर्ष

यह प्रयोग मानक "उच्च प्रदर्शन तरल क्रोमैटोग्राफी द्वारा फ़ीड में मेथियोनीन हाइड्रोक्सी एनालॉग का निर्धारण" (GB/T 19371-2025) के अनुसार किया गया था।एक यूवी डिटेक्टर से लैस Wayeal LC3400 श्रृंखला उच्च प्रदर्शन तरल क्रोमैटोग्राफ का उपयोगप्रयोगात्मक परिणामों से पता चला कि लक्ष्य चोटी ने 0 की एकाग्रता सीमा से ऊपर अच्छी समरूपता और उच्च सैद्धांतिक प्लेट संख्या का प्रदर्शन किया।5🙏80.0μg/mL, सहसंबंध गुणांक (R) 0 से ऊपर था।9998. आरएसडी मानों के लिए प्रतिधारण समय और पीक क्षेत्र के लिए एमएचए संदर्भ मानक (20.0μएमएचए का रिकवरी फ़ीड नमूनों में 40 पर पहुंच गया।0μएमएचए के लिए शोध की सैद्धांतिक सीमा (एलओडी) 0 निर्धारित की गई थी।033μजी/एमएल. एमएचए का सफलतापूर्वक फ़ीड के नमूने में 0 की एकाग्रता पर पता लगाया गया।402μउपरोक्त सभी आंकड़े उपकरण प्रदर्शन के लिए फार्माकोपिया विधि की आवश्यकताओं को पूरा करते हैं।