वायल एलसीएमएस-टीक्यू9200 एलसीएमएस/एमएस प्रणाली द्वारा चिली पाउडर में रोडामाइन बी का निर्धारण

रोडामाइन बी (जिसे रोज़ रेड बी या बेसिक वायलेट 10 भी कहा जाता है) एक सिंथेटिक बेसिक फ्लोरोसेंट डाई है जो ज़ैंथीन रासायनिक वर्ग से संबंधित है। यह पदार्थ स्वयं एक चमकीला गुलाब-लाल रंग प्रदर्शित करता है और पानी और इथेनॉल जैसे ध्रुवीय सॉल्वैंट्स में आसानी से घुलनशील है। प्रारंभ में, इसका व्यापक रूप से कपड़ा, छपाई और फ्लोरोसेंट लेबलिंग सहित औद्योगिक क्षेत्रों में उपयोग किया जाता था। इसकी कम लागत और मजबूत रंगाई क्षमता के कारण, कुछ बेईमान व्यापारियों ने इसे रंगाई के उद्देश्यों के लिए खाद्य उत्पादों में अवैध रूप से मिलाया है, जैसे कि मिर्च पाउडर, सिचुआन काली मिर्च, मांस उत्पाद और मसाले, जिससे यह खाद्य सुरक्षा को खतरे में डालने वाला एक महत्वपूर्ण संदूषक बन गया है।
रोडामाइन बी मानव शरीर के लिए स्पष्ट रूप से विषाक्त है। यह पाचन तंत्र या त्वचा के माध्यम से शरीर में प्रवेश कर सकता है, जिससे सामान्य शारीरिक चयापचय में बाधा उत्पन्न होती है। इसके अतिरिक्त, यह संभावित कार्सिनोजेनिक और म्यूटाजेनिक जोखिम प्रस्तुत करता है। परिणामस्वरूप, इसे कई देशों द्वारा गैर-खाद्य पदार्थ के रूप में वर्गीकृत किया गया है जो भोजन में निषिद्ध है। यह खाद्य सुरक्षा पर्यवेक्षण का एक प्रमुख लक्ष्य है, और विभिन्न मसालों और प्रसंस्कृत खाद्य पदार्थों में इसका पता लगाने की दर लगातार उच्च बनी हुई है।

इस एप्लिकेशन नोट में, भोजन में रोडामाइन बी के निर्धारण के लिए एक लिक्विड क्रोमैटोग्राफी-टैंडम मास स्पेक्ट्रोमेट्री (LC-MS/MS) विधि को WAYEAL LCMS-TQ9200 लिक्विड क्रोमैटोग्राफी-टैंडम मास स्पेक्ट्रोमेट्री सिस्टम का उपयोग करके स्थापित किया गया था। यह विधि कुशल निष्कर्षण, सटीक पृथक्करण और लक्ष्य विश्लेषक के संवेदनशील मात्रा का ठहराव प्राप्त करती है, जबकि खाद्य मैट्रिक्स हस्तक्षेपों को प्रभावी ढंग से समाप्त करती है। यह भोजन में रोडामाइन बी की तीव्र स्क्रीनिंग और सटीक मात्रा का ठहराव के लिए विश्वसनीय तकनीकी सहायता प्रदान करता है, जिससे प्रभावी खाद्य सुरक्षा पर्यवेक्षण की सुविधा मिलती है।

कीवर्ड: खाद्य सुरक्षा, रोडामाइन बी, LCMS/MS

1. उपकरण और अभिकर्मक

1.1 उपकरण विन्यास

तालिका 1 उपकरण विन्यास सूची

1.2 अभिकर्मक और मानक सूची

तालिका 2 अभिकर्मक और मानक सूची

1.3 प्रयोग सामग्री और सहायक उपकरण

वोर्टेक्स मिक्सर

उच्च गति सेंट्रीफ्यूज

विश्लेषणात्मक संतुलन

सॉलिड फेज एक्सट्रैक्शन (SPE) मैनिफोल्ड (वैक्यूम पंप के साथ)

नाइट्रोजन इवेपोरेटर

ऑर्बिटल शेकर

2. प्रयोग विधि

2.1 समाधान तैयारी

2.1.1 पानी में 0.1% फॉर्मिक एसिड: 1mL फॉर्मिक एसिड को 500mL पानी में स्थानांतरित करें, अच्छी तरह मिलाएं, और पानी के साथ 1000 mL का अंतिम आयतन बनाएं।

2.1.2 एसिटोनिट्राइल में 0.1% फॉर्मिक एसिड: 1mL फॉर्मिक एसिड को 500mL एसिटोनिट्राइल में स्थानांतरित करें, अच्छी तरह मिलाएं, और एसिटोनिट्राइल के साथ 1000mL का आयतन ठीक करें।

2.1.3 पानी में 50% मेथनॉल: 500mL मेथनॉल को सटीक रूप से 1L वॉल्यूमेट्रिक फ्लास्क में स्थानांतरित करें, फिर पानी के साथ आयतन ठीक करें।

2.1.4 0.1% फॉर्मिक एसिड के साथ पानी में 50% मेथनॉल: 1mL फॉर्मिक एसिड को पानी में 50% मेथनॉल के 500mL में स्थानांतरित करें, अच्छी तरह मिलाएं, और पानी में 50% मेथनॉल के 1000 mL के आयतन तक पतला करें।

2.1.5 मेथनॉल में 5% अमोनिया: 5mL अमोनिया समाधान को 100mL वॉल्यूमेट्रिक फ्लास्क में स्थानांतरित करें, मेथनॉल के साथ आयतन तक पतला करें, और अच्छी तरह मिलाएं।

2.2 नमूना पूर्व-उपचार

2.2.1 नमूना निष्कर्षण

मिर्च पाउडर के 1g नमूने को सटीक रूप से 50mL प्लास्टिक सेंट्रीफ्यूज ट्यूब में तौलें। 0.1% फॉर्मिक एसिड युक्त 50% मेथनॉल जलीय घोल के 10.0mL को सटीक रूप से जोड़ें, और अच्छी तरह मिलाएं। दो सिरेमिक होमोजेनाइज़र जोड़ें, फिर एक वोर्टेक्स मिक्सर पर 15 मिनट के लिए वोर्टेक्स करें। 10 मिनट के लिए 8000 आर/मिनट पर सेंट्रीफ्यूज करें। सुपरनैटेंट (अर्क परत) के 3mL को स्थानांतरित करें और शुद्धिकरण से पहले 0.45μm कार्बनिक-चरण फिल्टर झिल्ली के माध्यम से फ़िल्टर करें।

2.2.2 नमूना शुद्धिकरण

नोवाप्रे MCX सॉलिड फेज एक्सट्रैक्शन (SPE) कार्ट्रिज कंडीशनिंग: उपयोग से पहले, कार्ट्रिज को क्रमशः 3mL मेथनॉल और 3mL पानी से सक्रिय करें।

सटीक रूप से 1.0mL अर्क को नोवाप्रे MCX सॉलिड फेज एक्सट्रैक्शन (SPE) कार्ट्रिज पर स्थानांतरित करें। कार्ट्रिज को क्रमशः 3mL 0.1% फॉर्मिक एसिड पानी में, 3 mL पानी, और 3mL मेथनॉल से धोएं। अमोनिया इन मेथनॉल घोल के 6mL के साथ लक्ष्य विश्लेषक को एल्यूट करें, और एलुएट को इकट्ठा करें। 45°C पर नाइट्रोजन की धारा के तहत एलुएट को लगभग सूखा होने तक वाष्पित करें। अवशेष को प्रारंभिक मोबाइल चरण के 0.5mL में घोलें, 0.22μm कार्बनिक-चरण फिल्टर झिल्ली के माध्यम से फ़िल्टर करें, और फिर उपकरण विश्लेषण के लिए फ़िल्ट्रेट इंजेक्ट करें।

2.3 प्रयोग की स्थितियाँ

2.3.1 HPLC स्थितियाँ

क्रोमैटोग्राफिक कॉलम: C18, 1.7μm, 2.1*50mm;
मोबाइल चरण: चरण A: पानी में 0.1% फॉर्मिक एसिड; चरण B: एसिटोनिट्राइल में 0.1% फॉर्मिक एसिड;
प्रवाह दर: 0.4 mL/min;
कॉलम तापमान: 40 °C;
इंजेक्शन मात्रा: 1µL।

2.3.2 मास स्पेक्ट्रोमेट्री स्थितियाँ

तालिका 3 यौगिक मास स्पेक्ट्रोमेट्री पैरामीटर

नोट: * क्वांटिफायर आयन।

3. प्रयोग परिणाम

3.1 मानक क्रोमैटोग्राम

रोडामाइन बी का पता 7 मिनट के भीतर पूरा हो गया था। जैसा कि चित्र 1 में दिखाया गया है, यौगिक शिखर ने अच्छी शिखर आकृति और संतोषजनक प्रतिक्रिया प्रदर्शित की, जो प्रयोगात्मक निर्धारण के लिए आवश्यकताओं को पूरा करती है।

चित्र 1 रोडामाइन बी का क्रोमैटोग्राम

3.2 रैखिक सीमा

मानक वक्र तैयार करने के लिए प्रारंभिक मोबाइल चरण के साथ सटीक रूप से पतला रोडामाइन बी मानक कार्य समाधान की एक उपयुक्त मात्रा स्थानांतरित की गई थी। रैखिक सीमा 0.1–10ng/mL थी। रैखिक परिणामों और ज्ञात सांद्रता के बीच विचलन अधिकतम स्वीकार्य विचलन के भीतर था। निर्धारण का गुणांक (R²) 0.999 से अधिक था, जो अच्छी रैखिकता को दर्शाता है।

चित्र 2 रोडामाइन बी मानक वक्र

3.3 मात्रा का पता लगाने की सीमा और पता लगाने की सीमा

इस विधि में, रोडामाइन बी के लिए पता लगाने की सीमा (LOD) और मात्रा का पता लगाने की सीमा (LOQ) क्रमशः 0.1 ng/mL और 0.5 ng/mL पर स्थापित की गई थी। संबंधित सिग्नल-टू-नॉइज़ (S/N) अनुपात नीचे दी गई तालिका में संक्षेपित हैं। LOD पर S/N अनुपात 3 से अधिक थे, जबकि LOQ पर वे 10 से अधिक थे।

तालिका 4 मात्रा का पता लगाने की सीमा और पता लगाने की सीमा

चित्र 3 रोडामाइन बी (0.1ng/mL) के लिए LOD पर सिग्नल-टू-नॉइज़ अनुपात

चित्र 4 रोडामाइन बी (0.5ng/mL) के लिए LOQ पर सिग्नल-टू-नॉइज़ अनुपात

3.4 पुनरावृत्ति

तीन सांद्रता (0.5, 2, और 5ng/mL) पर मानक समाधानों को लगातार छह बार इंजेक्ट किया गया था। परिणाम नीचे दी गई तालिका में दिखाए गए हैं। कम, मध्यम और उच्च सांद्रता पर रोडामाइन बी के प्रतिधारण समय और शिखर क्षेत्र के सापेक्ष मानक विचलन (RSDs) सभी 5% के भीतर थे, जो प्रयोगात्मक आवश्यकताओं को पूरा करते थे।

तालिका 5. कम, मध्यम और उच्च सांद्रता पर रोडामाइन बी के लिए पुनरावृत्ति परीक्षण

चित्र 5 0.5ng/mL रोडामाइन बी के 6 लगातार इंजेक्शन के क्रोमैटोग्राम

चित्र 6 2ng/mL रोडामाइन बी के 6 लगातार इंजेक्शन के क्रोमैटोग्राम

चित्र 7 5ng/mL रोडामाइन बी के 6 लगातार इंजेक्शन के क्रोमैटोग्राम

3.5 स्पाइक रिकवरी

नमूना ए को 2ng/mL से रोडामाइन बी सांद्रता बढ़ाने के लिए एक मानक समाधान के साथ स्पाइक किया गया था। फिर छह प्रतिकृति इंजेक्शनों का विश्लेषण किया गया। प्राप्त रिकवरी 105.7% थी जिसमें 1.473% का RSD था, जो विधि स्वीकृति मानदंडों को पूरा करता था।

3.6 कैरीओवर

10ng/mL मानक समाधान को इंजेक्ट करने के बाद, कैरीओवर का मूल्यांकन करने के लिए एक खाली विलायक इंजेक्ट किया गया था। परिणाम नीचे दिए गए चित्र में दिखाए गए हैं। खाली में कैरीओवर सबसे कम अंशांकन मानक (0.1ng/mL) के 10% से कम था, जो प्रयोगात्मक आवश्यकताओं को पूरा करता था।

चित्र 8 यौगिक का खाली क्रोमैटोग्राम

3.7 नमूना परीक्षण

नमूना ए में रोडामाइन बी सांद्रता विधि का पता लगाने की सीमा (MDL) से नीचे थी।

चित्र 9 नमूना ए में रोडामाइन बी का क्रोमैटोग्राम

4. निष्कर्ष

इस अध्ययन में, WAYEAL LCMS-TQ9200 सिस्टम का उपयोग करके रोडामाइन बी के निर्धारण के लिए एक लिक्विड क्रोमैटोग्राफी-टैंडम मास स्पेक्ट्रोमेट्री (LC-MS/MS) विधि स्थापित की गई थी। प्राप्त डेटा ने प्रदर्शित किया कि विधि ने अच्छी समरूपता और कोई टेलिंग के बिना क्रोमैटोग्राफिक शिखर उत्पन्न किए, और संवेदनशीलता ने प्रयोगात्मक आवश्यकताओं को पूरा किया। निर्धारण का गुणांक (R²) 0.999 से अधिक था, जो रैखिकता मानदंडों को पूरा करता था। कम, मध्यम और उच्च सांद्रता पर पुनरावृत्ति (RSD) 5% के भीतर थी, और खाली में कैरीओवर सबसे कम अंशांकन मानक के 10% से कम था। ये परिणाम इंगित करते हैं कि विधि, WAYEAL LC-MS/MS सिस्टम के साथ मिलकर, लक्ष्य विश्लेषकों के लिए नियमित गुणात्मक और मात्रात्मक पहचान आवश्यकताओं को पूरा करने में सक्षम है।