2025-10-16
वाष्पीकरणीय प्रकाश-प्रसारण डिटेक्टर (ईएलएसडी) एक उपन्यास द्रव्यमान डिटेक्टर है जिसका सैद्धांतिक रूप से किसी भी यौगिक पर लागू किया जा सकता है जो गैस के रूप में कणों का गठन कर सकता है।फार्माकोपिया के 2025 संस्करण में 100 से अधिक दवाओं की किस्मों के विश्लेषण और गुणवत्ता नियंत्रण के लिए वाष्पीकरण प्रकाश-प्रसारण पता लगाने (ईएलएसडी) के उपयोग को निर्दिष्ट किया गया है।प्रैक्टिस में, ELSD को अधिक बार पराबैंगनी (UV) अवशोषण से वंचित यौगिकों पर लागू किया जाता है, जैसे कि एस्ट्रागलोसाइड, कार्बोहाइड्रेट, अमीनोग्लाइकोसाइड और कोलेस्ट्रॉल,अक्सर यूवी और फ्लोरोसेंस डिटेक्टरों के लिए एक पूरक पता लगाने की विधि के रूप में सेवाहालांकि, ELSD परिणाम कई कारकों से प्रभावित होते हैं, जिनमें मोबाइल चरण संरचना, कार्बनिक विलायक सांद्रता, एल्यूशन मोड और नेबुलाइजेशन स्थितियां शामिल हैं।सटीक और सुसंगत विश्लेषण परिणाम सुनिश्चित करने के लिए, इन कारकों के परिणामों पर प्रभाव का मूल्यांकन करना आवश्यक है।
यह अध्ययन, 2025 फार्माकोपिया के भाग II से स्पेक्टिनोमाइसिन हाइड्रोक्लोराइड के लिए विश्लेषणात्मक विधि का संदर्भ लेते हुए और ICH QbD सिद्धांतों का मार्गदर्शन करते हुए,विश्लेषणात्मक परिस्थितियों को छानने और अनुकूलित करने के लिए एक ऑर्थोगोनल प्रयोगात्मक डिजाइन का उपयोग किया.
चित्र 1 स्पेक्टिनोमाइसिन हाइड्रोक्लोराइड
2साधन और विधि
इस अध्ययन में क्रोमैटोग्राफिक विश्लेषण Wayeal की LC3200 श्रृंखला HPLC प्रणाली का उपयोग करके किया गया था। उपकरण विन्यास में एक चतुर्धातुक ढाल पंप, एक ऑटोसैंपलर,एक स्तंभ कक्ष, और एक वाष्पीकरणीय प्रकाश-प्रसारण डिटेक्टर। सिस्टम नियंत्रण और डेटा अधिग्रहण/प्रसंस्करण स्मार्टलैब 2.0 क्रोमैटोग्राफी सॉफ्टवेयर के साथ किया गया।
तालिका 1 एचपीएलसी शर्तें
| क्रोमैटोग्राफी स्तंभ | नोवा एटम पीसी18 (4.6*250 मिमी, 5μm) |
| मोबाइल चरण | 0.1मोल/एल ट्राइफ्लोरोएसिटिक एसिड जलीय समाधान |
| प्रवाह दर (mL/min) | 0.6 |
| स्तंभ का तापमान | 35 |
| इंजेक्शन वॉल्यूम (μL) | 20 |
| ELSD नेबुलाइज़र तापमान (°C) | 85 |
| ELSD वाष्पीकरण का तापमान (°C) | 80 |
| ELSD पता लगाने का तापमान (°C) | 50 |
| गैस प्रवाह दर (SLM) | 0.2 |
3. समाधान तैयार करना
नमूना समाधान:स्पेक्टिनोमाइसिन हाइड्रोक्लोराइड का स्टॉक समाधान ग्राहक द्वारा 10 मिलीग्राम/ मिलीलीटर की लेबल वाली एकाग्रता और 99.8% शुद्धता के साथ प्रदान किया गया था।
0.1M ट्राइफ्लोरोएसिटिक एसिड जलीय घोल:एक 1000 मिलीलीटर के वॉल्यूमेट्रिक फ्लास्क में 6.8 मिलीलीटर ट्राइफ्लोरोएसीटिक एसिड को सटीक रूप से पिपेट करें। शुद्ध पानी के साथ निशान तक पतला करें और अच्छी तरह से मिश्रण करें। अंत में, वैक्यूम-फिल्टर समाधान को एक 0 के माध्यम से।उपयोग से पहले 45μm सेल्युलोज झिल्ली फ़िल्टर.
मानक समाधानःस्टॉक सॉल्यूशन को शुद्ध पानी से पतला किया गया ताकि 0 की सांद्रता के साथ नमूना समाधान तैयार किया जा सके।15, 0.25, 0.35, 0.50, और 0.70mg/mL, क्रमशः। प्रत्येक समाधान को उपयोग से पहले 0.45μm सेल्युलोज झिल्ली फिल्टर के माध्यम से फ़िल्टर किया गया था।
4परिणाम और चर्चा
चीनी फार्माकोपिया में स्पेक्टिनोमाइसिन हाइड्रोक्लोराइड प्रविष्टि के तहत संबंधित पदार्थों और मुख्य घटक सामग्री का विश्लेषण करने के लिए समान क्रोमैटोग्राफिक परिस्थितियों का उपयोग किया जाता है।विधि में कहा गया है कि "डिटेक्टर को वास्तविक परिस्थितियों के आधार पर कॉन्फ़िगर किया जा सकता है." अध्ययन के दौरान, ELSD3260 की उपकरण विशेषताओं, विश्लेषणात्मक विधि की आवश्यकताओं और प्रासंगिक साहित्य को ध्यान में रखते हुए,कई प्रयोगात्मक मापदंडों की जांच के लिए एक प्लेकेट-बर्मन प्रयोगात्मक डिजाइन का उपयोग किया गया था (तालिका 2 और 3)इसके बाद, ELSD डिटेक्टर की पीक क्षेत्र प्रतिक्रिया को अनुकूलित करने के लिए एक बॉक्स-बेनकेन डिजाइन (तालिका 4) का उपयोग किया गया।
तालिका 2 प्लेकेट-बर्मन प्रयोगात्मक डिजाइन
| नहीं. | प्रवाह दर ((mL/min) | स्तंभ तापमान ((°C) | नेबुलाइज़र तापमान (°C) | वाष्पीकरण का तापमान (°C) | पता लगाने का तापमान (°C) | गैस प्रवाह दर (SLM) | स्तंभ के पश्चात् मुआवजा |
| 1 | 0.8 | 35 | 60 | 50 | 50 | 0.4 | नहीं |
| 2 | 0.6 | 35 | 50 | 60 | 50 | 0.6 | नहीं |
| 3 | 0.6 | 30 | 60 | 60 | 50 | 0.4 | हाँ |
| 4 | 0.8 | 30 | 60 | 60 | 40 | 0.6 | नहीं |
| 5 | 0.6 | 35 | 60 | 50 | 40 | 0.6 | हाँ |
| 6 | 0.8 | 30 | 50 | 50 | 50 | 0.6 | हाँ |
| 7 | 0.8 | 35 | 50 | 60 | 40 | 0.4 | हाँ |
| 8 | 0.6 | 30 | 50 | 50 | 40 | 0.4 | नहीं |
तालिका 3 प्लेकेट-बर्मन प्रयोगात्मक परिणामों का एनोवा विश्लेषण
| भिन्नता का स्रोत | गुणांक | टी-मूल्य | पी-मूल्य | महत्व |
| प्रवाह दर | - छह।687 | - आठ।10 | <0.01 | 2 |
| स्तंभ का तापमान | 0.191 | 0.22 | 0.824 | 6 |
| नेबुलाइज़र तापमान (°C) | 5.342 | 6.29 | <0.01 | 3 |
| वाष्पीकरण का तापमान (°C) | 4.135 | 4.87 | <0.01 | 4 |
| पता लगाने का तापमान (°C) | 0.171 | 0.21 | 0.842 | 7 |
| गैस प्रवाह दर (SLM) | - दस।381 | - बारह।23 | <0.01 | 1 |
| स्तंभ के पश्चात् मुआवजा | - दो।559 | - तीन।02 | <0.01 | 5 |
जैसा कि तालिका 3 से देखा जा सकता है, गैस प्रवाह दर, मोबाइल चरण प्रवाह दर, और पोस्ट-स्तंभ मुआवजे ने नकारात्मक प्रभाव दिखाया। विशेष रूप से, गैस प्रवाह दर और मोबाइल चरण प्रवाह दर को कम करने से,स्तंभ के बाद के मुआवजे को अक्षम करने के साथ, क्रोमैटोग्राफिक पीक प्रतिक्रिया को बढ़ा सकता है। हालांकि, मोबाइल चरण प्रवाह दर को कम करने से पीक चौड़ाई में वृद्धि और पता लगाने की संवेदनशीलता में कमी आ सकती है। इसलिए,प्रवाह दर मानक विधि के अनुरूप बनाए रखा गया थाजबकि स्तंभ तापमान और पता लगाने के तापमान ने सकारात्मक प्रभाव दिखाया, उन्होंने प्रतिक्रिया मूल्य को महत्वपूर्ण रूप से नहीं बढ़ाया।बाद के अध्ययनों में गैस प्रवाह दर को अनुकूलित करने पर ध्यान केंद्रित किया जाएगा, नेबुलाइज़र तापमान, और वाष्पीकरण तापमान।
गैस प्रवाह दर, नेबुलाइज़र तापमान,और वाष्पीकरणकर्ता तापमान प्रतिक्रिया मूल्य पर एक प्रतिक्रिया सतह पद्धति ढांचे के भीतर एक बॉक्स-Behnken प्रयोगात्मक डिजाइन का उपयोग कर जांच की गईप्रयोगात्मक डिजाइन तालिका 4 में प्रस्तुत किया गया है।
तालिका 4 बॉक्स-बेनकेन प्रयोगात्मक डिजाइन
| नहीं. | गैस प्रवाह दर (SLM) | नेबुलाइज़र तापमान (°C) | वाष्पीकरण का तापमान (°C) |
| 1 | 0.15 | 75 | 80 |
| 2 | 0.15 | 85 | 80 |
| 3 | 0.25 | 75 | 80 |
| 4 | 0.25 | 85 | 80 |
| 5 | 0.15 | 80 | 75 |
| 6 | 0.15 | 80 | 85 |
| 7 | 0.25 | 80 | 75 |
| 8 | 0.25 | 80 | 85 |
| 9 | 0.2 | 75 | 75 |
| 10 | 0.2 | 75 | 85 |
| 11 | 0.2 | 85 | 75 |
| 12 | 0.2 | 85 | 85 |
| 13 | 0.2 | 80 | 80 |
The detection conditions for spectinomycin hydrochloride were determined by simulating the peak area variation using response surface methodology (Figure 2) and considering the instrumental parameter ranges: नेबुलाइज़र का तापमान 85°C, वाष्पीकरणकर्ता का तापमान 80°C, डिटेक्टर का तापमान 50°C और गैस प्रवाह दर 0.2 SLM।
A. पीक क्षेत्र पर गैस प्रवाह दर और वाष्पीकरक तापमान का प्रभाव
B. पीक क्षेत्र पर गैस प्रवाह दर और नेबुलाइज़र तापमान का प्रभाव
सी. पीक क्षेत्र पर नेबुलाइज़र तापमान और वाष्पीकरणकर्ता तापमान का प्रभाव
चित्र 2 शिखर क्षेत्र में परिवर्तन
इंजेक्शन की सटीकता
स्पेक्टिनोमाइसिन हाइड्रोक्लोराइड के स्टॉक सॉल्यूशन को 0. 35mg/mL तक पतला किया गया और निर्दिष्ट क्रोमैटोग्राफिक परिस्थितियों में छह लगातार इंजेक्शन किए गए और क्रोमैटोग्राम रिकॉर्ड किए गए।स्पेक्टिनोमाइसिन हाइड्रोक्लोराइड क्रोमैटोग्राफिक पीक के लिए प्रतिधारण समय और शिखर क्षेत्र के सापेक्ष मानक विचलन (RSD%) की गणना की गई।परिणाम तालिका 5 में दिखाए गए हैं।
तालिका 5 इंजेक्शन सटीकता परीक्षण के परिणाम
| नहीं. | प्रतिधारण समय (मिनट) | पीक एरा (एसयू*एस) |
| 1 | 7.625 | 259.124 |
| 2 | 7.615 | 245.223 |
| 3 | 7.618 | 270.250 |
| 4 | 7.608 | 237.267 |
| 5 | 7.627 | 254.977 |
| 6 | 7.613 | 255.548 |
| आरएसडी (%) | 0.09 | 4.49 |
विशिष्टता
विश्लेषणात्मक प्रक्रियाओं के सत्यापन पर आईसीएच Q2 ((R2) दिशानिर्देश और चीनी फार्माकोपिया के सामान्य अध्याय ¥9101 ¥ विश्लेषणात्मक विधि सत्यापन पर दिशानिर्देश के अनुसार,अनुकूलित विधि की विशिष्टता सत्यापित की गई, रैखिक सीमा, सटीकता और दोहराव।
शुद्ध पानी और नमूना समाधान (0.35 mg/mL) का विश्लेषण रेकॉर्ड किए गए क्रोमैटोग्राम के समानांतर किया गया।परिणामों (चित्र 3) शुद्ध पानी क्रोमैटोग्राम में spectinomycin हाइड्रोक्लोराइड के प्रतिधारण समय पर कोई क्रोमैटोग्राफिक चोटी नहीं दिखाया, जबकि नमूना समाधान में स्पेक्टिनोमाइसिन हाइड्रोक्लोराइड के लिए शिखर ने आसन्न शिखरों से प्रारंभिक रेखा पृथक्करण प्राप्त किया (R > 1.5).
चित्र 3 स्पेक्टिनोमाइसिन हाइड्रोक्लोराइड नमूना (0.35mg/mL) के विश्लेषणात्मक परिणाम
रैखिक सीमा
स्टैंडर्ड समाधान तैयार करने की विधि के अनुसार स्पेक्टिनोमाइसिन हाइड्रोक्लोराइड स्टॉक सॉल्यूशन के तीन समानांतर नमूने तैयार करें, उन्हें क्रोमैटोग्राफिक परिस्थितियों में विश्लेषण करें,और गुणसूत्रों को रिकॉर्ड करेंक्रोमैटोग्राफिक पीक क्षेत्र और संबंधित सांद्रता का उपयोग करके प्रतिगमन विश्लेषण करें।
चित्र 4 रैखिकता परीक्षण परिणाम (लॉग-परिवर्तित बनाम अपरिवर्तित)
साहित्य के अनुसार, ELSD प्रतिक्रिया मूल्य और एकाग्रता के बीच संबंध गैर-रैखिक है,रिग्रेशन विश्लेषण करने से पहले प्रतिक्रिया मूल्य और एकाग्रता दोनों के लघुगणकीय परिवर्तन की आवश्यकता होती है [8].,9प्रयोगात्मक आंकड़ों पर लघुगणकीय परिवर्तन लागू करने के बाद, रैखिक प्रतिगमन वक्र का सहसंबंध गुणांक 0 से अधिक हो गया।999, जो कि लॉगरिथमिक परिवर्तन के बिना प्राप्त परिणाम से काफी बेहतर है (चित्र 4 में दिखाया गया है) ।
सटीकता और दोहराव
स्पेक्टिनोमाइसिन हाइड्रोक्लोराइड स्टॉक सॉल्यूशन को 0.25, 0.35प्रत्येक एकाग्रता के लिए, तीन समानांतर नमूने तैयार किए गए, निर्दिष्ट क्रोमैटोग्राफिक परिस्थितियों में विश्लेषण किया गया और क्रोमैटोग्राम दर्ज किए गए।सामग्री की गणना प्रतिगमन वक्र का उपयोग करके की गई, और वसूली और दोहराव का मूल्यांकन किया गया। परिणाम तालिका 6 में प्रस्तुत किए गए हैं।
तालिका 6 वसूली परीक्षण के परिणाम
| नहीं. | वास्तविक मूल्य (एमजी/एमएल) | गणना मूल्य (एमजी/एमएल) | वसूली (%) | रिकवरी आरएसडी (%) |
| 1 | 0.25 | 0.252 | 100.8 |
1.36 |
| 2 | 0.25 | 0.251 | 100.4 | |
| 3 | 0.25 | 0.246 | 98.4 | |
| 4 | 0.35 | 0.348 | 99.4 | |
| 5 | 0.35 | 0.352 | 100.6 | |
| 6 | 0.35 | 0.344 | 98.3 | |
| 7 | 0.50 | 0.505 | 101.0 | |
| 8 | 0.50 | 0.513 | 102.6 | |
| 9 | 0.50 | 0.504 | 100.8 |
मात्रा की सीमा (LOQ)
स्ट्रेप्टोमाइसिन हाइड्रोक्लोराइड स्टॉक सॉल्यूशन को 12μg/mL की एकाग्रता तक पतला करें। क्रोमैटोग्राफिक परिस्थितियों में नमूना का विश्लेषण करें और क्रोमैटोग्राम रिकॉर्ड करें।स्ट्रेप्टोमाइसिन हाइड्रोक्लोराइड क्रोमैटोग्राफिक पीक के संकेत-शोर अनुपात (एस/एन) की गणना करें और इसकी दोहरावशीलता निर्धारित करेंपरिणाम तालिका 7 में दिखाए गए हैं।
तालिका 7 LOQ परीक्षण परिणाम
| नहीं. | एसएनआर | शिखर क्षेत्र (एसयू*एस) | पीक क्षेत्र आरएसडी (%) |
| 1 | 15.647 | 3.416 |
8.45 |
| 2 | 10.634 | 2.928 | |
| 3 | 15.728 | 3.145 | |
| 4 | 12.842 | 3.529 | |
| 5 | 14.662 | 3.396 | |
| 6 | 11.076 | 3.730 |
परिणामों से पता चलता है कि आईसीएच दिशानिर्देश की आवश्यकता के तहत एस/एन > 10,स्पेक्टिनोमाइसिन हाइड्रोक्लोराइड समाधान की इस एकाग्रता के लिए शिखर क्षेत्र का सापेक्ष मानक विचलन मानदंडों को पूरा करता हैइसलिए, यह स्पेक्टिनोमाइसिन हाइड्रोक्लोराइड के लिए मात्रात्मक सीमा मानक के रूप में कार्य कर सकता है।
5निष्कर्ष
फार्माकोपियल पद्धति के आधार पर, इस अध्ययन ने स्पेक्टिनोमाइसिन हाइड्रोक्लोराइड की मात्रा के लिए एक विश्वसनीय और मजबूत विश्लेषणात्मक प्रक्रिय
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