सूअर के मांस में नाइट्रोइमिडाजोल अवशेषः Wanyi LCMS-TQ9200 LC-MS/MS विधि GB 31658.23-2022 के अनुसार मान्य
2026-10-21
नाइट्रोइमिडाज़ोल सिंथेटिक जीवाणुरोधी और एंटीप्रोटोज़ोअल दवाएं हैं जो एनारोबिक बैक्टीरिया और ट्राइकोमोनाड्स को प्रभावी ढंग से रोकती हैं। वे कभी पशुधन और जलीय कृषि में पाचन संक्रमण और प्रोटोज़ोअल रोग को नियंत्रित करने, जीवित रहने की दर में सुधार करने के लिए व्यापक रूप से उपयोग किए जाते थे। फिर भी मूल दवाएं और उनके मेटाबोलाइट्स स्पष्ट रूप से विषाक्त हैं: वे जानवरों में कई सक्रिय मेटाबोलाइट्स में तेजी से मेटाबोलाइज़ होते हैं, जिनमें से कुछ मूल यौगिक की तुलना में ऊतक में बहुत लंबे समय तक बने रहते हैं।
विषाक्तता अध्ययन से पता चलता है कि नाइट्रोइमिडाज़ोल मूल और उनके मुख्य मेटाबोलाइट्स संभावित रूप से कार्सिनोजेनिक, म्यूटाजेनिक और जीनोटॉक्सिक हैं। पशु-व्युत्पन्न भोजन में अवशेष खाद्य श्रृंखला के माध्यम से मानव शरीर में प्रवेश करते हैं, और लंबे समय तक कम-खुराक सेवन हेमटोपोएसिस में हस्तक्षेप कर सकता है, गुणसूत्रों को नुकसान पहुंचा सकता है और जीन उत्परिवर्तन के जोखिम को बढ़ा सकता है। इसलिए चीन ने खाद्य-उत्पादक जानवरों में नाइट्रोइमिडाज़ोल पर प्रतिबंध लगा दिया है, और पशु-व्युत्पन्न भोजन में कोई अवशेष की अनुमति नहीं है, जिससे खाद्य सुरक्षा के लिए सटीक अवशेष परीक्षण आवश्यक हो गया है।
GB 31658.23-2022, पशु-व्युत्पन्न भोजन में नाइट्रोइमिडाज़ोल अवशेषों के लिए तरल क्रोमैटोग्राफी टैंडम मास स्पेक्ट्रोमेट्री द्वारा राष्ट्रीय खाद्य सुरक्षा मानक, इस कार्य का वैधानिक आधार है। यह बोवाइन, ओवाइन और अन्य पशु मैट्रिक्स में मूल दवाओं और मेटाबोलाइट्स को कवर करता है। एक परीक्षण प्रयोगशाला को चार लक्षित यौगिकों - मेट्रॉनिडाज़ोल, हाइड्रॉक्सीमेट्रॉनिडाज़ोल, डाइमेट्रिडाज़ोल और हाइड्रॉक्सीडाइमेट्रिडाज़ोल - जिसमें हाइड्रॉक्सी मेटाबोलाइट्स भी शामिल हैं, जिन्हें सब-पीपीबी स्तर पर, कम कैरीओवर और लंबे इंजेक्शन अनुक्रमों में स्थिर परिशुद्धता के साथ बनाए रखना और आयनित करना कठिन है, के लिए एक मान्य वर्कफ़्लो की आवश्यकता थी।
| वस्तु | विन्यास |
|---|---|
| एलसी-एमएस/एमएस सिस्टम | वायी एलसीएमएस-टीक्यू9200 ट्रिपल क्वाड्रुपोल |
| विश्लेषणात्मक कॉलम | सी18, 1.6 um, 2.1 x 100 mm |
| मोबाइल चरण ए | 0.1% फॉर्मिक एसिड पानी में |
| मोबाइल चरण बी | 0.1% फॉर्मिक एसिड एसीटोनिट्राइल में |
| प्रवाह दर | 0.3 मिली/मिनट |
| कॉलम तापमान | 40 डिग्री सी |
| इंजेक्शन मात्रा | 4 uL |
| सहायक उपकरण | अल्ट्रासोनिक बाथ, वोर्टेक्स मिक्सर, हाई-स्पीड सेंट्रीफ्यूज, वाटर बाथ, नाइट्रोजन इवेपोरेटर, एनालिटिकल बैलेंस |
50 मिलीलीटर सेंट्रीफ्यूज ट्यूब में 2 ग्राम नमूना (0.05 ग्राम तक सटीक) तौलें, 10 uL 1 ug/mL मिश्रित आंतरिक मानक कार्य समाधान डालें, 30 सेकंड के लिए वोर्टेक्स करें और 10 मिनट के लिए खड़ा रहने दें। 15 मिलीलीटर एथिल एसीटेट डालें, 2 मिनट के लिए वोर्टेक्स करें और 5 मिनट के लिए 10,000 आरपीएम पर सेंट्रीफ्यूज करें। सुपरनैटेंट को स्थानांतरित करें और एक और 15 मिलीलीटर एथिल एसीटेट के साथ एक बार फिर से निष्कर्षण दोहराएं। दोनों अर्क को मिलाएं और 25 डिग्री सी पानी के स्नान में नाइट्रोजन के तहत सुखाएं।
अवशेष को 5 मिलीलीटर 0.1 मोल/एल हाइड्रोक्लोरिक एसिड में घोलें, 1 मिनट के लिए वोर्टेक्स करें, 5 मिलीलीटर एन-हेक्सेन डालें, 1 मिनट के लिए हिलाएं और 5,000 आरपीएम पर 5 मिनट के लिए सेंट्रीफ्यूज करें। हेक्सेन परत को त्याग दें और एक और 5 मिलीलीटर हेक्सेन के साथ एक बार फिर से डीफ़ैटिंग चरण दोहराएं। एक ठोस चरण निष्कर्षण कार्ट्रिज को 3 मिलीलीटर 0.1 मोल/एल हाइड्रोक्लोरिक एसिड और 3 मिलीलीटर मेथनॉल से कंडीशन करें, जलीय परत लोड करें, 3 मिलीलीटर 0.1 मोल/एल हाइड्रोक्लोरिक एसिड से धोएं और 4 मिलीलीटर मेथनॉल से एल्यूट करें। 35 डिग्री सी पर नाइट्रोजन के तहत 35 डिग्री सी पर एलुएट को सुखाएं, 0.5 मिलीलीटर पानी में पुनर्गठित करें, 1 मिनट के लिए वोर्टेक्स करें और इंजेक्शन से पहले फ़िल्टर करें।
| पैरामीटर | परिणाम |
|---|---|
| रन टाइम | चार एनालिटिक्स और आंतरिक मानक 8 मिनट के भीतर अलग हो गए, सममित चोटियां, मजबूत प्रतिक्रिया |
| रैखिकता | मैट्रिक्स-मिलान अंशांकन 2, 4, 20, 40, 200 और 400 ug/L पर; सभी चार यौगिकों के लिए R2 0.9995 से ऊपर, 20% सीमा के तहत विचलन |
| एलओडी और एलओक्यू | 0.5 ug/kg पर सिग्नल-टू-नॉइज़ 3 से ऊपर और 1 ug/kg पर 10 से ऊपर, 0.5 ug/kg एलओडी और 1 ug/kg एलओक्यू आवश्यकताओं को पूरा करता है |
| परिशुद्धता (एन = 6) | 2 ng/mL पर RSD 6% से नीचे और 20 ng/mL पर 3% से नीचे, 10% सीमा के मुकाबले |
| कैरीओवर | 400 ng/mL टॉप स्टैंडर्ड के बाद ब्लैंक इंजेक्शन एलओक्यू पीक एरिया के 20% से काफी नीचे |
| स्पाइक रिकवरी | 2 ng/mL पर 61.8% से 103.35% और 20 ng/mL पर 104.35% से 107.15%, 60% से 120% आवश्यकता के भीतर |
| असली पोर्क नमूना | चार नाइट्रोइमिडाज़ोल में से कोई भी पता नहीं चला |
ब्लैंक पोर्क एक्सट्रैक्ट में मैट्रिक्स-मिलान अंशांकन मांस मैट्रिक्स से आयन दमन की भरपाई करता है और ट्रेस स्तर पर मात्रात्मकता को विश्वसनीय रखता है। पीक आकार अच्छे थे जिनमें कोई टेलिंग नहीं थी, यह पुष्टि करते हुए कि एथिल एसीटेट निष्कर्षण, हेक्सेन डीफ़ैटिंग और एसपीई सफाई 1 ug/kg पर हस्तक्षेप को हटाते हैं।
वायी एलसीएमएस-टीक्यू9200 एलसी-एमएस/एमएस सिस्टम ने GB 31658.23-2022 के तहत पोर्क में चार नाइट्रोइमिडाज़ोल अवशेषों के लिए एक मान्य विधि प्रदान की। सममित चोटियां, 0.9995 से ऊपर R2, 10% के भीतर परिशुद्धता, नगण्य कैरीओवर और 60% से 120% के भीतर रिकवरी यह प्रदर्शित करती है कि वर्कफ़्लो प्रतिबंधित पशु चिकित्सा दवा स्क्रीनिंग और पुष्टि के लिए नियमित गुणात्मक और मात्रात्मक आवश्यकताओं को पूरा करता है, और खाद्य सुरक्षा जोखिम निगरानी के लिए एक भरोसेमंद तकनीकी आधार प्रदान करता है।
- ट्रिपल क्वाड्रुपोल एमआरएम अधिग्रहण 0.5 ug/kg पर फैटी मीट मैट्रिक्स में प्रतिबंधित अवशेषों की पुष्टि करने के लिए आवश्यक चयनात्मकता प्रदान करता है।
- 0.3 mL/min पर 2.1 मिमी कॉलम पर सब-2 um C18 केमिस्ट्री 8 मिनट से कम समय में चार एनालिटिक्स को हल करती है, जिसमें कम विलायक खपत होती है।
- आइसोटोप-लेबल वाले आंतरिक मानक निष्कर्षण और एसपीई के दौरान रिकवरी हानियों के लिए सुधार करते हैं, जिससे बैचों में परिणाम स्थिर होते हैं।
- एसपीई से पहले हेक्सेन डीफ़ैटिंग कार्ट्रिज और विश्लेषणात्मक कॉलम की सुरक्षा करता है, जिससे उच्च-थ्रूपुट अवशेष प्रयोगशालाओं में सेवा जीवन का विस्तार होता है।
